实验五 注射剂的制备

一、实验目的

1. 通过实验建立无菌概念，掌握无菌与灭菌制剂生产工艺中的关键操作。

2. 掌握注射剂生产的工艺过程和操作要点。包括注射剂所用容器的处理、配液、滤过、灌封通气、灭菌等基本操作。

3. 熟悉注射剂成品质量检查标准和方法，包括安瓿的漏气检查、澄明度检查、pH值检查等基本操作，了解影响成品质量的因素。

4. 熟悉无菌操作室的洁净处理、空气灭菌等。

二、实验原理

注射剂系指用药物制成的供注入体内的无菌溶液、乳状液和混悬液，以及供临用前配制成溶液或混悬液的无菌粉末。

注射剂起效迅速，剂量准确，特别是常作急救危重病人用的静脉滴注的输液。由于注射剂直接注入体内，吸收快，所以对生产过程和质量控制，都要求极其严格。注射剂的质量要求包括无菌、无热原、澄明度合格、使用安全、应无毒性和刺激性；注射液的 pH值应接近体液，一般控制在4-9范围内；凡大量静脉注射或滴注的输液，应调节渗透压与血浆渗透压相等或接近；稳定性合格，即在贮存期内稳定有效；含量合格；在水溶液中不稳定的药物，常制成注射用无菌粉末，以保证注射剂在贮存期内稳定、安全、有效。

生产灭菌制剂的厂房设施必须根据卫生部颁布的《药品生产质量管理规范》（GMP）的原则设置，厂房必须按生产工艺和产品质量的要求划分洁净级别。一般可分别一般生产区、控制区、洁净区。一般生产区指无洁净度要求的生产或辅助房间。控制区是指对空气洁净度有一定要求的生产或辅助房间。洁净区是指有较高洁净度和菌落数要求的生产房间。房间设计的布局要合理，人流物流要严格分开。洁净级别要求高的厂房对相邻的洁净级别低的厂房一般呈相对正压。生产车间及各岗位操作区，均应按生产和洁净级别的要求进行清洁、消毒。洁净厂房内空气的尘粒数和活微生物数应符合规定，温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应。

注射剂的灭菌方法，应根据灭菌的药物及其制剂的稳定性进行选择。热压灭菌法是制备注射剂和滴眼剂最常使用的方法。热压灭菌器系受压容器，使用时要谨慎，应遵守正规的操作规程，以免发生事故。手提式热压灭菌器的使用方法见附录。

三、实验仪器与试剂

空安瓿、输液瓶、垂熔玻璃漏斗、微孔滤膜及其装置、二氧化碳钢瓶、灌注器、熔封灯、澄明度检查装置、蒸锅、天平、灭菌锅、橡皮塞、涤纶膜、安瓿切割器、干燥箱、减压滤过装置、容量瓶、玻璃棒、烧杯等、热压灭菌器、量筒、量杯、

维生素C、碳酸氢钠、焦亚硫酸钠、依地酸二钠、盐酸、注射用水、葡萄糖、检漏用色素溶液、稀洗液、1～2%硝酸钠硫酸洗液

四、实验内容与操作

（一）维生素C（抗坏血酸）注射液的制备

1. 处方

维生素C        52.0g （即按104%投料）

碳酸氢钠       约24.2g

焦亚硫酸钠     2.0g

依地酸二钠     0.05g

注射用水       1000ml

2. 操作

（1）灭菌制剂室的地面、台面先用水擦拭，然后用2%煤酚皂擦拭，UV照射1h。

（2）空安瓿的处理

目前国内大多使用易折安瓿，生产安瓿时已经将安瓿进行了切割和圆口，可直接进行洗涤。手工洗涤应先用水冲刷外壁，然后灌满蒸馏水或去离子水，加热100℃，30min。趁热甩水，再用过滤蒸馏水洗两次，澄明度合格的注射用水洗一次，倒置插盘中，120-140℃烘干备用。（可根据空安瓿清洁度而选择是否采用热处理或酸处理）

（3）注射液的配制

①容器处理：配制用的一切容器，均需清洗保证洁净，避免引入杂质及热原。

②滤器等处理：

垂熔玻璃漏斗：先用水反冲，除去药液留下的杂质，沥干后用洗液（1～2%硝酸钠硫酸洗液）浸泡处理，用水冲净，最后用注射用水过滤至滤出水检查pH值不显酸性，并检查澄明度合格为止。

微孔滤膜：常用的是由醋酸、硝酸纤维素混合酯组成的微孔滤膜。经检查合格的微孔滤膜（孔径有0.65μm、0.8μm）浸泡于注射用水中1h，煮沸5min，如此反复三次，或用80℃注射用水浸泡4h以上，室温则需浸泡12h，使滤膜中纤维充分膨胀，增加滤膜韧性。使用时用镊子取出滤膜且使毛面向上，平放在膜滤器的支撑网上，注意滤膜不被皱摺或刺破，装好后应完整无缝隙，无泄露现象，用注射用水过滤，滤出水澄明度合格，即可将滤器盖好备用。

乳胶管：先用水揉洗，再用0.5%～1%氢氧化钠液适量，煮沸30min，洗去碱水；0.5%-1%盐酸适量，煮沸30min，蒸馏水洗至中性，再用注射用水煮沸即可。

③惰性气体的处理：因本品极易氧化，故配制时需通惰性气体，常用的是二氧化碳或氮。使用纯度较低的二氧化碳、可用分别装有浓硫酸，1%硫酸铜，1%高锰酸钾溶液的洗气瓶处理之，以分别除去水分、硫化物、有机物和微生物，最后经注射用水洗气瓶除去可溶性杂质和二氧化硫。现在生产常用的高纯氮（含N₂99.99%），可不经处理，或仅分别通过50%甘油、注射用水洗气瓶即可使用。

二氧化碳在水中溶解度及密度都大于氮，故凡与二氧化碳不发生作用的产品通入二氧化碳比通入氮好，但注意二氧化碳会使药液的pH下降。

④配液：按处方取配制量80%的注射用水，通入二氧化碳（约20～30min）使其饱和，称取并加入依地酸二钠溶解，加维生素C使溶，分次缓缓加入碳酸氢钠，并不断搅拌至无气泡产生，待完全溶解后，加焦亚硫酸钠溶解，调节药液pH值至5.8～6.2，最后加用二氧化碳饱和的注射用水至足量。用G₃垂熔玻璃漏斗预滤，再用0.65μm的微孔滤膜精滤，检查滤液澄明度合格后，即可灌封。

（4）灌封

①灌注器的处理：首先要检查灌注器玻璃活塞是否严密不漏水，用稀洗液浸泡再抽洗灌装器（用水冲洗、蒸馏水冲洗）至不显酸性，最后用注射用水抽洗至流出水澄明度检查合格，即可灌装药液备用。

②装量调节：在灌装前先调节灌装器装量，按药典规定适当增加装量，以保证注射液用量不少于标示装量，见附录。

③熔封灯火焰调节：熔封时要求火焰细而有力，燃烧完全。单焰灯在黄蓝火焰两层火焰交界处温度最高；双焰灯的两火焰应有一定夹角，火焰交点处温度最高。

④灌封操作：将过滤合格的药液，立即灌装于2ml安瓿中，通入二氧化碳于安瓿上部空间，随灌随封。灌装要求装量准确，药液不沾安瓿径壁，以免熔封时焦头，一般措施是使药液瓶略低于灌注器位置，灌注针头先用硅油处理，快拉慢压可以防止焦头。熔封时可将颈部放于火焰温度最高处，掌握好安瓿在火焰中停留时间，及时熔封。熔封后的安瓿顶部应圆滑、无尖头或鼓泡等现象。

（5）灭菌与检漏 灌封好的安瓿，应及时灭菌，可用100℃流通蒸气灭菌15min。灭菌完毕后立即将安瓿放入1%亚甲蓝的溶液中，挑出药液被染色的安瓿。将合格安瓿外表用水洗净、擦干、供质量检查用。

3. 质量检查与评定

（1）装量：按照2000年版药典二部附录7页检查方法进行，2ml安瓿检查5支，每支装量均不得少于其标示装量（见附录）。

（2）澄明度：按卫生部关于注射剂澄明度检查规定进行（见附录）。

（3）pH值测定：应为5.0～7.0（2000年版药典二部附录46页）

（4）含量测定：按2000年版药典二部793页测定，应为标示量的90.0%-110.0%。

测定方法：精密量取本品适量（约相当于维生素C 0.2g），加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5min，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1 mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C₆H₈O₆。

（5）热源：取本品依法检查（2000年版药典二部附录85页），剂量按家兔体重每1kg注射2ml，应符合规定。

（6）颜色：取本品，加水稀释成每1ml中含维生素C 50mg的溶液，照分光光度法（2000年版药典二部附录26页），在420nm的波长处测定，吸收度不得大于0.06。

（7）无菌：按无菌检查法项下（2000年版药典二部附录89页）检查，应符合规定。

4. 成品印字和包装 每支安瓿上印字应包括品名、规格、批号，字迹清晰，不易磨灭。

5. 注意事项

（1）配液时，注意将碳酸氢钠撒入维生素C溶液中的速度应慢，以防产生的气泡使溶液溢出，同时要不断搅拌，以免局部过碱。

（2）维生素C容易氧化变质致使含量下降，颜色变黄，尤其当金属离子存在时变化更快。故在处方中加入抗氧剂并通二氧化碳，一切容器、工具、管道不得露铁、铜等金属。

（3）掌握好灭菌温度和时间，灭菌完毕立即检漏冷却，避免安瓿因受热时间延长而影响药液的稳定性，同时注意避光。

（二）葡萄糖注射液的制备 500ml/瓶

1. 处方

葡萄糖（注射用） 50g

盐酸              适量

注射用水          加至1000ml

2. 操作

（1）容器的准备

①输液瓶的处理：先以水冲洗，再用2%氢氧化钠溶液（50-60℃）或2%-3%碳酸氢钠溶液（50-60℃）浸泡并刷洗，再用水冲洗至中性，最后用蒸馏水或去离子水冲洗。临用前尚需用注射用水冲洗两次。

②橡皮塞处理：橡皮塞先用水搓洗，用0.5%～1%氢氧化钠煮沸约30min，热水洗净，再用0.5～1%盐酸煮沸约30min，水洗净酸，用蒸馏水或去离子水漂洗并煮沸30min，临用前再用注射用水至少洗三次。

③涤纶膜的处理：将膜用75%～95%乙醇浸洗或用注射用水煮沸30min，再用注射用水反复漂洗，至漂洗后的注射用水仍澄明无异物为止。

（2）配制：按处方量称取葡萄糖，加适量热注射用水溶解，配成50%～60%的浓溶液，用盐酸调节pH值至4.5左右，加上述浓溶液的0.1%～0.3%（g/ml）注射用炭，搅匀、加热煮沸15min，趁热过滤除炭。滤液加注射用水至配制量，测pH及含量合格后用适宜滤器预滤，最后用微孔滤膜（孔径0.8μm）过滤，检查澄明度合格，即可灌装。

（3）灌装：输液瓶临用前用新鲜的澄明度合格的注射用水再冲洗两次。将合格滤液立即灌装，并随即用漂洗合格的涤纶膜盖好，加橡皮塞、铝帽封口。

（4）灭菌与检漏：灌封好的输液应及时于115℃热压灭菌30min。灭菌过程应严格按照操作规程，预热时排尽锅内空气再使温度上升，并控制好灭菌温度和时间。灭菌结束立即停止加热，并缓缓放气使压力表指针回复至零，待温度表降温至90℃以下，开启锅盖，取出输液，冷至50℃，将药瓶轻轻倒置，不得有漏气现象。本工序应特别注意安全。

3. 质量检查与评定

(1)澄明度：按卫生部关于注射剂澄明度检查的规定(见附录)检查，应符合规定要求。

不溶性微粒 将澄明度检查合格的输液1瓶，按2000年版药典二部附录IX C检查，应符合规定。

(2)pH值：应为3.2～5.5，注意灭菌前后pH变化。

(3)热原：取本品按2000年版药典二部附录XI D检查，应符合规定。

(4)细菌内毒素：取本品按2000年版药典二部附录XI E检查，应符合规定。

(5)含量测定：按2000年版药典二部葡萄糖注射液项下测定旋光度，并计算含量。

(6)其它：应符合注射剂项下有关规定。

4. 成品贴签和包装 瓶签上应印有品名、规格、主药含量及批号。

5. 注意事项

(1)选用质量好的原辅料，采用浓配法，加注射用炭吸附，趁热过滤以及包装用输液瓶、橡皮塞、涤纶膜的处理等，都是消除注射液中小白点，提高澄明度，除去热原、霉菌等的有效措施。

(2)本品易生长霉菌等微生物，又是供静脉滴注用量较大的注射液，故在全部制备过程应严防污染，从配制至灭菌，应严密控制时间以免产生热原反应，一般控制从配液到灭菌完成的时间不超过4小时。

(3)输液的过滤要求滤速快、澄明度好。过滤除炭，要防止漏炭。预滤常用砂滤棒，然后用垂熔玻璃滤棒或漏斗，最后用微孔滤膜(孔径为0.8μm)作终端滤器。

(4)灭菌温度超过120℃，时间超过30min，溶液开始变黄，色泽的深浅与5-羟基糖醛产生的量成正比。故应注意灭菌温度和时间。灭菌完毕后，及时打开锅盖冷却。但要特别注意降温降压后才能启盖。

(5)葡萄糖溶液在灭菌后，常使pH值下降，故经验认为溶液pH值先调节至5左右，再加热灭菌较为稳定，变色最浅，且能符合药典规定的pH值。

五、实验结果和讨论

(一)维生素C注射液

1. 记录澄明度检查结果，可列表如下。

表14—3 澄明度检查结果